補體現(xiàn)貨，凍干補體應(yīng)該如何正確使用

使用方法：每支加0.5ml蒸餾水復(fù)溶，靜置10分鐘后輕輕搖勻；滴定時用緩沖生理鹽水或緩沖液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀釋使用，臨用現(xiàn)配。

穩(wěn)定性：4-8℃保存3年(暗處保存)

用途：總補體溶血活性(CH50)檢測使用

產(chǎn)品規(guī)格：0.5ml/支*10

注意事項：請穿戴實驗服及一次性手套操作。

血清總補體溶血活性(CH50)測定方法一、原理利用綿羊細胞與相應(yīng)抗體(溶血素)結(jié)合成的復(fù)合物，可激活血清中的補體，導(dǎo)致紅細胞溶解，當(dāng)紅細胞和溶血素量一定時，在規(guī)定反應(yīng)的時間內(nèi)，溶血程度與補體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血(CH50)時，二者之間近似直線關(guān)系，故以50%溶血作為敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的小補體量為一個CH50U，可計算出待測血清中總的補體溶血活性，以CH50U/ml表示。

本實驗主要反映補體經(jīng)典活化途徑的溶血功能，其結(jié)果與補體C1～C9各組成分的量及活性均有關(guān)。

二、試劑及配制

1.緩沖生理鹽水：(1)貯存液：Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸餾水定容至100ml4℃保存?zhèn)溆?2)應(yīng)用液：5ml貯存液加95ml蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1ml，當(dāng)日配制，12小時內(nèi)使用。

2.2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液洗3次，并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數(shù)法使懸液細胞濃度標準化。

3.溶血素：將綿羊紅細胞溶血素(效價1:4000)，用應(yīng)用液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999ml應(yīng)用液)。

4.待測血清：新鮮血液室溫放置30min，再4℃放置60min，使血收縮，4℃離心(3000r/min)10min，取上清，-20℃保存。

三、操作步驟試管法(改良Mayer法)

1.致敏羊紅細胞：2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000)，混勻，置37℃水浴30min。

2.稀釋血清：待測血清0.2ml，加應(yīng)用液3.8ml，稀釋度為1:20。

3.配制溶血標準管：全溶血管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水，混勻。50%溶血管:取全溶血管液2ml加緩沖液2ml。

4.按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30min，第10管為非溶血對照：補體CH50測定試管法

5.結(jié)果測定：取出試管，2000r/min離心10min，對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測(波長542nm、0.5cm比色杯)OD值，確定與標準管接近者為終點管，然后按下公式計算CH50值：血清補體CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀釋度。如第5管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。

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