即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候。比如，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性。

為了對(duì)付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類(lèi)型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對(duì)一種蛋白酶，也可以是廣譜的。

人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類(lèi)型，以及它們可逆或不可逆，對(duì)蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類(lèi)。如何選擇和使用？這似乎是一個(gè)難題，光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了。下面讓我們來(lái)聽(tīng)聽(tīng)專(zhuān)業(yè)人士的建議。

從雞尾酒開(kāi)始

蛋白酶抑制劑的選擇，取決于每個(gè)用戶(hù)的個(gè)性化實(shí)驗(yàn)，不過(guò)對(duì)于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用，抑制劑混合物（或者說(shuō)雞尾酒）通常是個(gè)比較保險(xiǎn)的選擇，可阻斷不同的蛋白酶。Abbexazui的抑制劑就是兩種混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF；這兩者都適用于裂解液。“它們普遍適用，適合許多樣品，無(wú)論是新鮮還是FFPE組織，抑或不同的物種，”Abbexa的Sabrina Calabressi談道。

若研究人員希望保留目的蛋白，同時(shí)維持細(xì)胞健康，默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對(duì)四種蛋白酶的抑制劑，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III。它可抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶。

有時(shí)，不那么特異的抑制劑似乎是個(gè)更好的選擇。“在裂解細(xì)胞或制備組織勻漿液時(shí)，使用具有廣譜特異性的抑制劑，”Mohan說(shuō)。“它們應(yīng)當(dāng)快速反應(yīng)，與蛋白酶不可逆結(jié)合，并在蛋白純化后輕松去除。”

盡管如此，選擇困難癥還是圍繞著你。Abbexa認(rèn)為，嘗試不同的類(lèi)型是供應(yīng)商的責(zé)任，而不是研究人員的。這家公司建議你和供應(yīng)商交流，讓他們將利用自己的專(zhuān)業(yè)知識(shí)來(lái)幫你選擇。通常，Abbexa在了解研究人員的特定分析、樣品類(lèi)型和應(yīng)用之后，才推薦*的抑制劑。

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